概括：这道题是丰估吓同学的课后生物练习题，主要是关于电泳，指导老师为冉老师。电泳缓冲液是核酸、蛋白质凝胶电泳系统的一个重要组成， 是电泳场中的导体，也是维持电泳系统恒定 pH值的必要条件。其成分及其离子强度影 响物质的电泳迁移率，应避免与被分离的样 品发生化学反应而改变样品的理化性质或使 其丧失生物活性。电泳缓冲液中的EDTA 可螯合Mg离子等二价阳离子，防止电泳时激 活DNA酶及Mg离子与核酸生成沉淀。

题目：电泳

解：

主要注意一下几点：

凝胶正负极不要弄反向了,

控制电压及电泳时间,严控条带跑出

点样时,点样量不要溢出点样孔,注意枪头捅破点样孔的凝胶.

电泳时需要marker做对照,用于验证目拟标片段的大小,

电泳缓冲液需定期更换

相信做到以上几点,应该问题不大

参考思路：

电泳涂装我知道，是这个吗？

举一反三

例1： 蛋白质电泳制胶要注意哪些方面[语文练习题]

思路提示：

总结平时的实验经验,大概需要注意以下几条：

1.玻璃板需要清洗干净,不然蛋白质在凝胶中电泳会受到阻碍.一般用软布在自来水下清洗后用蒸馏水洗一下,或者直接偷懒的办法就是拿酒精棉球擦擦.

2.确保制胶所用试剂有效.

3.根据你的目的蛋白分子量确定胶的浓度.

一般采用如下：

蛋白分子量大小（kd） 凝胶百分比(10%)

4-40 20

12-45 15

10-70 12.5

15-100 10

25-200 8

4.水封：一定要注意缓慢加入水,不然由于冲的厉害,很容易最后胶不平.好的办法就是用乙醇封.

5.由于梳子质量问题,两边的“耳朵”容易断掉,这样两边的孔容易漏出,建议插梳子以后在梳子的上方再多加一些浓缩胶.

乐研生物,

例2： 电泳做凝胶回收时应注意哪些细节?我要做dna胶回收,查到一些方法,但是一些技术上的问题写的不清楚,希望能得到一些有价值的建议.以提高胶回收的效率[生物练习题]

思路提示：

DNA胶回收,应该就是琼脂糖电泳的吧?首先要确定方法,是试剂盒还是自己配的试剂,试剂盒的话有protocal,照着做就是了,自己配的呢操作流程也跟试剂盒差不多,基本上都是切胶--加热溶解--上柱结合--洗涤杂质--去离子水洗脱 其次需要注意的就是相对应的几个环节呢,首先电泳缓冲液一定要是新的,保证所用的器具的洁净,包括刀片,避免污染,倒的胶尽量比平时厚,保证样品全部上完,其次避免紫外的长时间照射,切胶的时候尽量少切胶,上柱结合的时候洗涤液一定要记得加酒精,洗涤后多敞洗脱液一般用去离子水30-50ul,可以洗两次.

例3： 使用醋酸纤维素薄膜电泳的注意事项,[生物练习题]

思路提示：

1、醋酸纤维素薄膜的预处理

　　市售醋酸纤维素薄膜均为干膜片,薄膜的浸润与选膜是电泳成败的重要关键之一.将干膜片漂浮于电极缓冲液表面,其目的是选择膜片厚薄及均匀度,如漂浮15s—30s时,膜片吸水不均匀,则有白斑点或条纹,这提示膜片厚薄不匀,应舍去不用,以免造成电泳后区带扭曲,界线不清,背景脱色困难,结果难以重复.由于醋酸纤维薄膜亲水性比纸小,浸泡30min以上是保证膜片上有一定量的缓冲液,并使其恢复到原来多孔的网状结构.最好是让漂浮于缓冲液的薄膜吸满缓冲液后自然下沉,这样可将膜片上聚集的小气泡赶着走.点样时,应将膜片表面多余的缓冲液用滤纸吸去,以免缓冲液太多引起样品扩散.但也不能吸得太干,太干则样品不易进入薄膜的网孔内,而造成电泳起始点参差不齐,影响分离效果.吸水量以不干不湿为宜.为防止指纹感染,取膜时,应戴指套或用镊子.

2、缓冲液的选择

醋酸纤维素薄膜电泳常选用pH8.6巴比妥溶液,其浓度为0.05mol/L—0.09mol/L.选择何种浓度与样品及薄膜的薄厚有关.选择时,先初步定下某一浓度,如电泳槽两极之间的膜长度为8 cm—10cm,则需电压25V/cm膜长,电流强度为0.4mA/cm—0.5mA/cm膜宽.当电泳达不到或超过这个值时,则应增加缓冲液浓度或进行稀释.缓冲液浓度过低,则区带泳动速度快,并由于扩散变宽；缓冲液浓度过高,则区带泳动速度慢,区带分布过于集中不易分辨.

3、加样量

　　加样品的多少与电泳条件、样品的性质、染色方法与检测手段灵敏度密切相关.作为一般原则,检测方法越灵敏,加样量则越少,对分离更有利.如加样量过大,则电泳后区带分离不清楚,甚至互相干扰,染色也较费时.如电泳后用洗脱法定量时,每厘米加样线上需加样品0.1μl—0.5μl约相当于5μg—1000μg蛋白.血清蛋白常规电泳分离时,每厘米加样线加样量不超过1μl,相当于60μg—80μg的蛋白质.但糖蛋白和脂蛋白电泳时,加样量则应多些.对每种样品加样量均应先作预实验加以选择.

　　点样好坏是获得理想图谱的重要环节之一,以印章法加样时,动作应轻、稳,用力不能太重,以免将薄膜弄坏或印出凹陷而影响电泳区带分离效果.

4、电量的选择

　　电泳过程应选择合适的电流强度,一般电流强度为0.4mA/cm—0.5mA/cm宽膜为宜.电流强度高,尤其在温度较高的环境中,可引起蛋白质变性或由于热效应引起缓冲液中水分蒸发,使缓冲液浓度增加,造成膜片干涸.电流过低,则样品泳动速度慢且易扩散.

5、染色液的选择

　　对醋酸纤维素薄膜电泳后染色应根据样品的特点加以选择.其原则是染料对被分离样品有较强的着色力,背景易脱色；应尽量采用水溶性染料,不宜选择醇溶性染料,以免引起醋酸纤维素膜溶解.

　　应控制染色时间.时间长,薄膜底色深不易脱去；时间短,着色浅不宜区分,或造成条带染色不均,必要时可进行复染.

6、透明及保存

　　透明液应临用前配制,以免冰乙酸及乙醇挥发影响透明效果.这些试剂最好选用分析纯.透明前,薄膜应完全干燥.透明时间应掌握好,如在透明乙液中浸泡时间太长则薄膜溶解,太短则透明度不佳.

　　透明后的薄膜完全干燥后才浸入石蜡中,使薄膜软化.如有水,则液体石蜡不易浸入,薄膜不易平展.

例4： P比在电泳中是求的啥

思路提示：

P比应该是磷化膜的P比吧?

磷化膜P比物理意义：代表磷化膜中P组分所占的比率,该值与磷化液的Zn2+含量、材质、磷化方式等因素有关.磷化膜P比可用下式表示：

P比=P／(P+H)式中

P——Zn2 Fe(PO4)2•4H2O的(100)晶面,d(晶面间距)=88.4nm时的x射线衍射强度；

H——Zn3(PO4)2•4H20的(0／20)晶面,d=90.4nm时的x射线衍射强度.

因此,P比=P／(P+H)已不是磷化膜Zn2M(PO4)2·4H2O的含量的直接指示,而是作为特定条件下产生的x射线衍射强度比.但习惯还是作为磷化膜中两种不同物质的比.P比高的磷化膜的耐蚀性、抗石击及磷化膜附着力均好.

例5： 请问电泳仪的使用注意事项有哪些?[物理练习题]

思路提示：

电泳仪/电泳槽注意事项：1.

电泳仪/电泳槽通电进入工作状态后,禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分,也不能到电泳槽内取放东西,如需要应先断电,以免触电.同时要求仪器必须有良好接地端,以防漏电.2.

仪器通电后,不要临时增加或拨除输出导线插头,以防短路现象发生,虽然仪器内部附设有保险丝,但短路现象仍有可能导致仪器损坏.3.

由于不同介质支持物的电阻值不同,电泳时所通过的电流量也不同,其泳动速度及泳至终点所需时间也不同,故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行.4.

在总电流不超过仪器额定电流时(最大电流范围)

,可以多槽关联使用,但要注意不能超载,否则容易影响仪器寿命.5.

某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时,允许在稳压状态下空载开机,但在稳流状态下必须先接好负载再开机,否则电压表指针将大幅度跳动,容易造成不必要的人为机器损坏.6.

电泳仪/电泳槽使用过程中发现异常现象,如较大噪音、放电或异常气味,须立即切断电源,进行检修,以免发生意外事故.

相关思考练习题：

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