知识点：《ms培养基》 收集：饶诙畔 编辑：百合仙子
本知识点包括：1、MS培养基的计算题，求助。 2、MS培养基中的MS什么意思 3、B5培养基与MS培养基的区别 4、ms培养基母液肌醇的扩大倍数为10倍，配制ms培养基5... 5、MS培养基配方的配制步骤 。

《ms培养基》相关知识

你要培养什么?基本培养基的种类有很多

参考思路：

是MSN培养基吧？我现在正在做这个。以配一升为准， 需要 苹果酸 4g, 酵母粉6g,； 磷酸缓冲溶液 100ml, MgSO4 0.25g, NH4Cl 1g ， CaCl2 0.01g 。 约加2.2g NaOH 可以把pH 调到6 若需要配固体培养基则加琼脂粉 12g

知识拓展：

1： MS培养基的配制与灭菌

知识要点归纳：

植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基.MS培养基的配制包括以下步骤.

培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液.这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液.现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用.

大量元素(母液Ⅰ) mg／L

NH4NO3 33 000

KNO3 38 000

CaCl2·2H2O 8 800

MgSO4·7H2O 7 400

KH2PO4 3 400

微量元素(母液Ⅱ)

KI 166

H3BO3 1 240

MnSO4·4H2O 4 460

ZnSO4·7H2O 1 720

Na2MoO4·2H2O 50

CuSO4·5H2O 5

CoCl2·6H2O 5

铁盐(母液Ⅲ)

FeSO4·7H2O 5 560

Na2-EDTA·2H2O 7 460

有机成分(母液Ⅳ)

ⅣA

肌醇 20 000

ⅣB

烟酸 100

盐酸吡哆醇(维生素B6) 100

盐酸硫胺素(维生素B1) 100

甘氨酸 400

以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液.

上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液.其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L.

母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5?5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中.

各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中.

MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6?苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0?1 mg/mL).其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0?1 mg/mL的母液.

配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 mL,母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL.再取2,D 5 mL、NAA 1 mL,与各种母液一起放入烧杯中.

配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时,应在量取各种母液之前,轻轻摇动盛放母液的瓶子,如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染,应立即淘汰这种母液,重新进行配制；②用量筒或移液管量取培养基母液之前,必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时,最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上,量取1种,划掉1种,以免出错.

溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中,再加入蒸馏水750 mL,用电炉加热,边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈半透明状.然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中,最后加蒸馏水定容至1 000 mL,搅拌均匀.

需要注意的是,在加热琼脂、制备培养基的过程中,操作者千万不能离开,否则沸腾的琼脂外溢,就需要重新称量、制备.此外,如果没有搪瓷量杯,可用大烧杯代替.但要注意大烧杯底的外表面不能沾水,否则加热时烧杯容易炸裂,使溶液外溢,造成烫伤.

调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液,逐滴滴入溶化的培养基中,边滴边搅拌,并随时用精密的pH试纸(5?0)测培养基的pH,一直到培养基的pH为5?8为止(培养基的pH必须严格控制在5?8).

培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装.分装时,先将培养基倒入烧杯中,然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50 mL或100 mL)中.注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上.锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5～1/4.每1 000 mL培养基,可分装25～30瓶.

培养基分装完毕后,应及时封盖瓶口.用2块硫酸纸(每块大小约为9 cm×9 cm)中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口,并用线绳捆扎.最后在锥形瓶外壁贴上标签.

高压灭菌 培养基的高压灭菌包括以下几个步骤.

第一,码放锥形瓶.将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中,再放入高压蒸气灭菌锅内.如果没有金属小筐,可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开.

第二,放置其他需要灭菌的物品.将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内,如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶(以上物品都要用牛皮纸封口),用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等.

第三,灭菌.待需要灭菌的物品码放完毕,盖上锅盖.在98 kPa、121.3 ℃下,灭菌20 min.

灭菌后取出锥形瓶,让其中的培养基自然冷却凝固.最好放置1 d后再使用.

2： 【MS植物培养基的配置过程中6-苄基嘌呤（6BA）是什么时候加入到培养基中?】

知识要点归纳：

以前我们好像是配制时就加了,然后分装灭菌.

3： 在配制培养基的过程中应该注意哪些问题?为什么

知识要点归纳：

1、培养基配方的选定

不用多说了吧,培养什么植物,用什么基础培养基,用什么激素,比例什么的

2、培养基的制备记录

实验记录...

3、培养基成分的称取

当然要乘凉准确了

4、培养基各成份的混合和溶化

各种成分之间,有可能会发生反应,一般是分开溶解的,如果是粗放型实

验,另当别论了

5、培养基pH的初步调正

植物生长pH至关重要,一般是5.6,同时 pH值也关系着培养基的凝固程

度.

6、培养基的过滤澄清

7、培养基的分装、灭菌

这得根据你培养基的成分来定你的灭菌条件,比如容易碳化,你可以降低

温度,提高时间来达到相同的效果

8、培养基的保存

一般都要放在5-8℃冰箱中

4： 关于配制MS培养基中激素浓度换算的问题现要配制1000mL的MS培养液,其中里面NAA激素的浓度是1mg/L,我现在有母液浓度是1mg/mL的NAA激素的母液,问需要加入母液多少?(我算的是1mL,别人算的是0.1mL).请

知识要点归纳：

1mg/ml是1mg/L的一千倍,所以配1000ml加1ml母液就对了,稀释一千倍.

5： 【求MS培养基的配制步骤,需要详细点的介绍,】

知识要点归纳：

激素母液的配制

各种生长素和细胞分裂素要单独配制,不能混合在一起,生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解,细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解,然后再加蒸馏水定容.一般取100mg配成100ml母液.

2、配制培养基

以配置1L MS培养基为例,按顺序进行如下操作：

1、先在烧杯中放入一些蒸馏水.

2、分别取MS中的母液10ml倒入.

3、一般称取30g蔗糖倒入,搅拌溶解.

4、加蒸馏水用量筒定溶至1L.

5、按设计好的方案添加各种激素,由于激素的用量很小,而且激素对组培植物的生长至关重要.所以有条件的话最好用微量可调移液器吸取,减少误差.

6、用精密试纸或酸度计调整PH至5.7-5.8.（有条件的话使用酸度计,比较精确） 可配1当量的HCL和1当量的NaOH用来调溶液PH值.

1当量HCL配制：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液.

1当量NaOH配制：称取NaOH 4g 配成100ml溶液.

7、称取5g左右琼脂粉（质量好的琼脂粉),倒入上面配好的溶液中,放在电炉上加热至沸腾,直到琼脂粉熔化.

8、稍微冷却后,分装入培养容器中.无盖的培养容器要用封口膜或牛皮纸封口,用橡皮筋或绳子扎紧.

9、放入消毒灭菌锅灭菌,灭菌20分钟左右.

10、灭菌后从灭菌锅中取出培养基,平放在实验台上令其冷却凝固.

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提示：这个其实很好算的，10X就是加十分之一，100X就是加百分之一。加的母液量=配的总体积/母液倍数。配800ml，加MSmax 80ml； MSmin 0.8ml；铁盐 8ml；有机16ml； BA和NAA的计算可以用左右溶质相等的公式，以BA为例：母液浓度（0.5mg/ml）*x(ml）=工...

2：MS培养基中的MS什么意思

提示：MS是Murashige and Skoog的缩写，MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围...

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5：MS培养基配方的配制步骤

提示：这样每次使用时，取其总量的1/20（50 mL）或1/200（5 mL），加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。大量元素（母液Ⅰ） mg/LNH4NO333 000KNO338 000CaCl2·2H2O8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元...

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